Одновременный анализ триазолов фунгицидов с помощью ВЭЖХ-ДМД
- Стенина Татьяна
- 14 июля 2022
Фунгициды – класс соединений, которые применяют для борьбы с паразитическими грибами и их спорами. Распространение грибковых инфекций негативно влияет на сельское хозяйство, приводя к потере урожая и в, конечном счете, прибыли. Сельхозпроизводители активно используют фунгициды, поскольку они сравнительно химически стабильны в окружающей среде. В частности, пактобутразол и униконазол –триазольные фунгициды, действующие еще и как регуляторы роста растений. Регуляторы роста так же предотвращают распространение растений, являющихся сорняками, и повышают урожайность таких растений, как перец и томат. Если пактобутразол повышает урожайность за счет устойчивости к микроскопическим грибкам и засухам, то униконазол традиционно используют как регулятор роста и цветения растений.

Рисунок 1. ВЭЖХ с диодноматричным детектором (ДМД)
Конфигурация хроматографа SCION Instruments LC6000 для одновременного анализа триазольных фунгицидов включает автоподатчик, колоночную печь и диодноматричный детектор. Калибровочные стандарты паклобутразола и униконазола приготовлены в концентрационном диапазоне от 0.10 мг/литр до 1 мг/литр. Проанализировали пять проб с различным содержанием триазолов. Детектор охватывает диапазон от 220 до 400 нм, линия поглощения для триазолов – 230 нм. Детали конфигурации приведены в таблице 1.
колонка |
C18 250 мм x 4.6 мм x 5 мкм |
Температура колонки |
30 °C Метанол : вода (0.1% муравьиной кислоты) |
Подвижная фаза |
70:30 |
Скорость потока |
1 мл/мин |
Объем пробы |
10 мкл |
DAD |
220-400 нм, 230 нм |
программа |
CompassCDS |
Таблица 1. Конфигурация хроматографа SCION Instruments LC6000
РЕЗУЛЬТАТЫ
Проанализировали калибровочные стандарты с концентрациями 0.1, 0.2, 0.5, 0.8 и 1 мг/литр для каждого триазола. Калибровочные кривые представлены на рисунке 2.
Рисунок 2. Калибровочные кривые пактобутразола и униконазола
Калибровочные графики паклобутазола и униконазола продемонстрировали превосходную линейность в диапазоне 0.1-1 мг/литр. Образцы с неизвестным содержанием триазолов были растворены в метаноле и проанализировали при тех же условиях, что указаны в таблице 1. Воспроизводимость метода определена при многократном (13 проб) заколе стандарта (0.5 мг/л) для каждого триазола. На рисунке 3 приведены наложения 13 хроматограмм для паклобутазола и униконазола.

Рисунок 3. Наложения хроматограмм паклобутазола и униконазола.
Как показано на рисунке 3 воспроизводимость 13-ти последовательных заколов проб 0.5 мг/литр была превосходной. Значение относительных стандартных отклонений времен удерживания и площадей пиков указаны в таблице 2.
Соединение |
RSD площадей пиков, % |
RSD времени удерживания, % |
паклобутразол |
0.74 |
0.21 |
униконазол |
0.33 |
0.21 |
Таблица 2. Стандартные отклонения и времена удерживания пиков фунгицидов.
Превосходная воспроизводимость свидетельствует о надежности метода. С минимальными изменениями времен удерживания и площадей пиков были проанализированы пять образцов, содержащих паклобутразол и униконазол. Расчет концентраций триазолов проводили с помощью калибровочных кривых (рисунок 2). На рисунке 4 приведена хроматограмма одного из образцов.
Рисунок 4. Хроматограмма смеси двух триазолов
На рисунке 4 представлена хроматограмма образца, в котором содержатся оба триазола. Время удерживания каждого и содержание триазольных фунгицидов определяли по стандартам. В таблице 3 приведены данные по образцам.
Образец |
Конц. паклобутразола, мг/л |
Конц. униконазола, мг/л |
1 |
0.54 |
0.51 |
2 |
0.81 |
0.81 |
3 |
0.08 |
0.09 |
4 |
0.18 |
0.19 |
5 |
1.0 |
1.0 |
Таблица 3. Концентрации триазолов в образцах
Все образцы содержали некоторое количество паклобутазола и униконазола. Для дальнейшей идентификации пиков использовали трехмерные данные диодного матричного детектора. Спектры триазолов в образцах сравнивали со спектральными линиями из библиотечных данных. На рисунке 5 приведены экспериментальный спектр униконазола и спектр, взятый из библиотеки.

Рисунок 5. Спектры стандартов и образца уникозолов.
На рисунке 5 показано сравнение спектров униконазола в одной из образцов с данными стандарта: синий график – спектр стандарта, красный – спектр образца. Два спектра, очевидно, принадлежат одному и тому же веществу. Для всех образцов спектры сравнивали со спектрами стандартов, в каждом случае можно было говорить о 100%-ном совпадении. Таким образом, с уверенностью можно говорить о присутствии двух триазолов в исследованных образцах. Использование диодного матричного детектора позволяет быть уверенным в идентификации соединений.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
SCION Instruments применили метод совместного определения двух триазольных фунгицидов. Содержание триазолов в продуктах строго регулируется, поскольку превышение ПДК наносит ущерб не только здоровью, но и снижает урожайностью сельхозпродукции. Использование трехмерных данных диодного матричного детектора дополняет информацию, необходимую для идентификации пиков паклобутразола и униконазола. Благодаря превосходной воспроизводимости и линейности хроматограф LC6000 от SCION Instruments идеально подходит для решения задач экологического мониторинга.
Источник
_______________________________________________________________________
Хроматографическое оборудование SCION: